| 產(chǎn)品名稱 |
MC3T3-E1 Subclone 14 |
| 商品貨號(hào) |
MZ-0233 |
| 中文名稱 |
小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14 |
| 細(xì)胞數(shù)量 |
1*10^6 |
| 組織來源 |
前骨細(xì)胞；自發(fā)永生；C57BL/6 |
| 細(xì)胞種屬 |
mus musculus, mouse |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)陰性。 |
| 生長(zhǎng)特性 |
adherent |
| 培養(yǎng)基 |
MEMα+10% FBS+1% P/S |
| 形態(tài)特征 |
fibroblast |
| 傳代方法 |
1:4-1:8 |
| 培養(yǎng)條件 |
Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃ |
| 細(xì)胞描述 |
該細(xì)胞是從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細(xì)胞系中分離出一系列亞克隆。從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長(zhǎng)的成骨細(xì)胞中選擇高或低成骨細(xì)胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3亞克隆4（ATCCCRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCCCRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機(jī)磷酸鹽中生長(zhǎng)表現(xiàn)出高水平的成骨細(xì)胞分化。它們10天后形成一個(gè)礦化良好的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）。MC3T3亞克隆24（ATCCCRL-2594）和MC3T3亞克隆30（ATCCCRL-2596）在抗壞血酸中生長(zhǎng)表現(xiàn)出很差的成骨細(xì)胞分化。 |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中 |
| 復(fù)蘇細(xì)胞步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 細(xì)胞凍存 |
Freeze medium: 50% basal medium+40% FBS+10%.DMSOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
| 細(xì)胞運(yùn)輸 |
干冰運(yùn)輸(2ml凍存管)或活細(xì)胞運(yùn)輸（T25細(xì)胞瓶） |
