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人高轉移肝癌細胞(HCCLM3)

人高轉移肝癌細胞(HCCLM3)介紹:

用人肝癌細胞株MHCC97-H 接種裸鼠,進行3 次肺轉移篩選,取肺轉移瘤建成皮下接種后高度自發性肺轉移的肝癌細胞系。

人高轉移肝癌細胞(HCCLM3)特性:

1) 來源:肝癌

2) 形態:上皮細胞樣,胞質內有顆粒

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

人高轉移肝癌細胞(HCCLM3)用途:僅供科研使用。

人高轉移肝癌細胞(HCCLM3)培養步驟:

一.人高轉移肝癌細胞(HCCLM3)培養基及培養凍存條件準備:

1)準備DMEM 培養基(DMEM,GIBCO,貨號11965-092);北美胎牛血清(United StatesGIBCO,貨號16000-044)10%;雙抗1%。

2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37 攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二.細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL 培養基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm 皿中,加入約8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并檢細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM 條件下離心4 鐘,棄去上清液,補加1-2mL 培養液后吹勻。

4. 細胞懸液按12 15 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。

下面T25 瓶為例;

1細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml 完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

21000RPM 離心5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO 至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻,按每1ml 的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106 個細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項:

1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

2. 所有動物細胞細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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